Грамдык боёк микробиологияда кеңири колдонулат, анткени бул бактерияларды клетка дубалынын курамына карап айырмалоонун эң оңой жолдорунун бири. Грам боюнча бардык бактерияларды грамм-оң (Грам (+)) жана грамм-терс (Грам (-)) деп бөлүүгө болот. Грам менен боёо ыкмасы 1884-жылы иштелип чыккан жана андан бери популярдуулугун жогото элек, бирок ал бир нече жолу өзгөртүлгөн.
Клетка дубалынын түзүлүшү
Грам менен боёо бактериянын Грам-оң же Грам-терс экендигин аныктайт. Бактериялардын Грам (+) жана Грам (-) болуп бөлүнүшү алардын клетка дубалынын түзүлүшүнө ылайык ишке ашат.
Клетка дубалында эң көп сандагы пептидогликан (муреин) бар - татаал зат, анын курамына пептапептид жана гликан кирет. Гликан бири-бири менен β-1 менен байланышкан N-ацетилглюкозамин менен N-ацетилмурамин кислотасынын кезектешкен калдыктарынан турат,4-гликозиддик байланыштар. Пептидогликан клетканын формасын сактоону, осмостук коргоону жана антигендик функцияларды камсыз кылат.
Грам-оң жана грам-терс бактериялардын негизги айырмачылыктары
Ар кандай бактериялардын пептидогликан катмарынын калыңдыгы ар кандай болот. Грам-оң деп классификацияланган бактерияларда 15тен 80 нмге чейин, ал эми грамм-терс бактерияларда 2ден 8 нмге чейин жетет. Ошол эле учурда грам-терс бактериялар пептидогликан катмарынын астында өзгөчө түзүлүшкө ээ, ал Грам-оң бактерияларда жок - периплазмалык мейкиндик. Бул мейкиндик гидролитикалык ферменттер - β-лактамаза, рибонуклеаза 1, фосфатаза менен толтурулган. Дал ушул ферменттер грам-терс бактериялардын көптөгөн антибиотиктерге туруктуулугуна жооптуу.
Бактериялардын Gram(-) пептидогликан катмары липополисахарид менен, эндотоксинди камтыган антигендик түзүлүш менен байланышкан. Грам(+) бактерияларда тейхой кислоталары окшош функцияларды аткарышат.
Грам-терс бактериялар кошумча түзүлүшкө ээ - тышкы мембрана.
Боёо ыкмасынын маңызы
Боёо баштаардан мурун изилденген бактериялардын мазектери даярдалат. Бул үчүн айнек слайдга суу тамчылатып, ал жерге бактериялык илмек менен микроорганизмдердин культурасы кошулат. Андан кийин, суу толугу менен кургатылгандан кийин, мазок бекитилет - айнек слайды оттуктун жалынын үстүнөн бир нече жолу өткөрүлөт. Грам менен боёо тирүү бактерияларды боёгонго караганда натыйжалуураак - боёктун молекулалары өлгөн клеткаларга жакшыраак байланышат.
Боёо бир нече этапта жүргүзүлөт:
- Фильтр кагазынын кичинекей кесектери бекитилген мазоктун үстүнө салынып, негизги боёк - гентиан фиолет же метилен көк куюлат.
- 3-5 мүнөттөн кийин түстүү фильтр кагазын алып, мазикти Люголь эритмеси менен 1 мүнөткө толтуруңуз. Бул учурда даярдоо карарып калат.
- Люголь эритмеси дренаждалат жана мазок таза этил спирти менен иштетилет: препаратка бир нече тамчы тамчылат, 20 секунддан кийин дренаждалат. Процедура 2-3 жолу кайталанат.
- Слайдды дистилденген суу менен сынамык менен чайкаңыз.
- Кошумча боёк чыгарыңыз - даярдоону фуксин менен бүтүрүңүз. 1-2 мүнөттөн кийин боёк жуулат.
- Суу кургагандан кийин, мазикти микроскоптун астында текшериңиз. Грам-оң бактериялар көк-кызгылт түстө, грам-терс бактериялар кызгылт же кызыл түстө болот.
Ар кандай боёонун себептери
Жогоруда сүрөттөлгөндөй, бактерияларды грамм менен боёо Грам-оң бактерияларды көк-кызгылт көк жана Грам-терс бактерияларды кызыл же кызгылт түскө боёйт. Бактериялардын бул ыкма менен дифференциалдуу боёшунун себеби, гентиан фиолетунун эрүүчү формасы клеткага киргенден кийин боёк эрибеген йод формасына өтөт. Бактерияларды этил спирти менен дарылоодо бул полярдуу эмес эриткичтин таасири астында мембранадан липиддер алынат. Андан кийин мембрана көзөнөктүү болуп калат жана боёкторду жууп кетүү үчүн олуттуу тоскоолдук болбой калат. Бирокпептидогликан полярдуу эмес эриткичтерге, анын ичинде спиртке туруктуураак. Ал боёктун жууп кетишине тоскоол болот, ошондуктан муреин катмары калың бактериялар көк-кызгылт көк түскө айланат (грам-оң), ал эми спирт менен дарылангандан кийин өңү өзгөрбөйт.
Грам-терс бактериялардын жука муреин катмары боёктун молекулаларын клеткада кармай албайт, ошондуктан спирттин таасиринен кийин алар түссүз болуп калат - грамм-терс боёлот.
Малак фуксиндин таасиринен кийин Грам менен боелгон бактериялар көк кызгылт, ал эми Грам-терс бактериялар кызгылт-кызыл түскө айланат.
Грам(+) жана Грам(-) бактерияларынын мисалдары
Грам-терс бактерияларга цианобактериялар, күкүрт бактериялары, темир бактериялары, хламидиоздор, риккетсиялар, уксус бактериялары, көптөгөн метилобактериялар, тиондук бактериялар, арсенитобактериялар, карбоксибактериялар кирет.
Бифидобактериялар, көптөгөн суу бактериялары, стрептококктар жана стафилококктар грам-оң.
