Энтеробактерияларды жана кээ бир вибриондорду дифференциалдуу аныктоодо Фогес-Проскауэр реакциясы өзгөчө орунду ээлейт. Сыноо бактериялардын глюкозаны ачытып, ацетоинди пайда кылуу жөндөмүнө негизделген.
Изилдөө процессинин маңызы
Микробиологияда Фогес-Проскауэр реакциясы көбүнчө энтеробактериялардын (анын ичинде псевдотуберкулез жана энтероколиттин козгогучтары), ичеги таякчасы жана спора түзүүчү аэробдордун Yersinia үй-бүлөсүндө дифференциациялоо үчүн колдонулат. Натыйжа белгилүү бир реагенттер кошулганда чөйрөнү боёп көрүүгө болот.
Бул тест IMViC сериясына таандык (Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate аббревиатурасы) - дифференциалдык аныктамаларды камтыган идентификациялык тесттердин тобу:
- индол менен, триптофандын индолга бөлүнүшүнүн негизинде, Ковач же Эрлих реагентинин катышуусунда колдонулат;
- колдонууметилрот же метил кызыл, ал глюкозанын метаболизациясынын натыйжасында берилген рНды аныктайт;
- Вогес-Проскауэр реакциялары ацетил-метилкарбинолду аныктоо үчүн;
- цитраттын чөйрөнүн алкализациясынын натыйжасында түсүнүн өзгөрүшү менен колдонулушу.
Процесстин маңызы диагностикаланган бактериялардын кычкылтектин катышуусунда алар түзүүчү ацетоиндин каустикалык калий менен өз ара аракеттенүүсүнүн визуализациясы болуп саналат. Ацетил-метилкарбинол диацетилге чейин кычкылданат, ал ачык кызыл же кызгылт түстөгү кошулманы пайда кылат. Каустикалык калийди кошуудан мурун альфа-нафтолду киргизүү менен тесттин сезгичтигин жогорулатыңыз.
Сыноо жөндөөсү
Фогес-Проскауэр реакциясынын формуласы микроорганизмдерди алдын ала өстүрүүнү камтыйт. Таза культура Кларктын дифференциалдык диагностикалык чөйрөсүнө себилет, анын вариациясы Кларктын сорпосу (агар-агар кошулбастан). Же даяр чөйрө колдонулат, же өз алдынча даярдалат. Ингредиенттерге төмөнкүлөр кирет:
- 5г пептон;
- 5г глюкоза;
- 5г эки негиздүү калий фосфаты;
- 1л дистиллят.
Изилдөө учурунда культура стерилдүү бактериологиялык илмек менен суюк чөйрөгө себилет. Саны - 5 мл пробиркада плюс контроль. Инкубация эки күн бою 35-37 градус температурада жүргүзүлөт. Андан кийин, Фогес-Проскауэр реакциясын изилдөө этап менен жүргүзүлөт:
- 2, 5 мл сорпонун маданияты стерилдүү түтүккө которулат.
- Алты тамчы альфа-нафтол (5% спирт эритмеси) кошуңуз.
- 40% кошуужегич калийдин 0,1 мл өлчөмүндөгү эритмеси же эки тамчы.
- Арлаштыруу пробирканы акырын силкилдетүү аркылуу жүргүзүлөт.
- Натыйжага эксперимент башталгандан 15 мүнөт өткөндөн кийин баа бериңиз.
Альтернативалуу сыноо ыкмасы – бул түнкү инкубация, анын убактысы 18 саатка же бир суткага чейин кыскарат. Бул ыкмадан тышкары экспресс-тест да колдонулат: культураны 2 мл чөйрөгө циклге киргизип, төрт саатка жакын инкубациялайт, андан кийин реагенттер бирдей өлчөмдө 2-3 тамчыдан кошулат, аралаштырылат жана натыйжа он мүнөттөн кийин бааланат.
Контроль пневмониянын козгогучтарынын бири Klebsiella pneumoniae - штамм atcc 13883.
Натыйжага баа берүү
Реагенттерди кошкондон кийин талап кылынган убакыт өткөндөн кийин (5 мүнөттөн 15 мүнөткө чейин) айкын оң реакция менен алча-кызыл түс, алсыз оң реакция менен кызыл жана кызгылт түс байкалышы керек. Терс натыйжа катары эч кандай өзгөрүү катталган жок.
Эритмедеги каустик калийдин ашыкча болушу жездин түсүнө боёлгон оң реакцияны туурайт. Бул учурда текшерилген колониянын терс жообу жазылууга тийиш. Ошондой эле, жез боёгу реагенттер киргизилгенден бир саат өткөндөн кийин баа берилген учурларда пайда болот.
Натыйжага баа берүүдө изилденүүчү микроорганизмдерди узакка өстүрүү (үч күндөн ашык) чөйрөнүн кычкылданышына алып келерин, бул изилдөөнүн туура эмес натыйжасына алып келерин эске алуу керек. Реакция бир аз оң же болушу мүмкүнжалган терс.
Сыноочу реагенттерге талаптар
Voges-Proskauer реагенттери туура концентрация, жогорку тазалык жана туруктуулук сыяктуу талаптарга жооп бериши керек, бул туура сактоо аркылуу ишке ашат.
Колдонууга даяр сыноо комплекттери, адатта, 100 же андан көп колдонуу үчүн реагенттерди камтыйт жана пластик же түстүү айнек флакондордо келет. Сапаты тиешелүү документтер менен жөнгө салынат.
