Микроскопиялык изилдөө ыкмалары – атайын жабдууларды колдонуу менен ар түрдүү объекттерди изилдөө ыкмалары. Ал бизге заттардын жана организмдердин түзүлүшүн карап чыгууга мүмкүндүк берет, алардын чоңдугу адамдын көзүнүн мүмкүнчүлүгүнөн тышкары. Макалада биз микроскопиялык изилдөө ыкмаларын кыскача талдайбыз.
Жалпы маалымат
Микроскопиялык изилдөөнүн заманбап ыкмалары ар кандай адистер тарабынан өз практикасында колдонулат. Алардын арасында вирусологдор, цитологдор, гематологдор, морфологдор жана башкалар бар. Микроскопиялык изилдөөнүн негизги ыкмалары узак убакыт бою белгилүү. Биринчиден, бул объектилерди көрүүнүн жеңил ыкмасы. Акыркы жылдары практикага башка технологиялар активдүү киргизилди. Ошентип, изилдөөнүн фазалык контраст, люминесцент, интерференция, поляризация, инфракызыл, ультрафиолет, стереоскопиялык методдору популярдуулукка ээ болду. Алардын баары ар кандай касиеттерге негизделген. Света. Мындан тышкары, электрондук микроскопиялык изилдөө ыкмалары кеңири колдонулат. Бул ыкмалар заряддалган бөлүкчөлөрдүн багытталган агымын колдонуу менен объекттерди көрсөтүүгө мүмкүндүк берет. Белгилей кетсек, мындай изилдөө ыкмалары биологияда жана медицинада гана эмес. Өнөр жайда металлдарды жана эритмелерди изилдөөнүн микроскопиялык ыкмасы абдан популярдуу. Мындай изилдөө муундардын жүрүм-турумун баалоого, бузулуу ыктымалдыгын азайтуу жана күчтү жогорулатуу үчүн технологияларды иштеп чыгууга мүмкүндүк берет.
Жеңил жолдор: мүнөздөмөлөр
Микроорганизмдерди жана башка объектилерди изилдөөнүн мындай микроскопиялык ыкмалары жабдуулардын ар кандай резолюцияларына негизделген. Бул учурда маанилүү факторлор нурдун багыты, объекттин өзүнүн өзгөчөлүктөрү. Акыркысы, атап айтканда, тунук же тунук эмес болушу мүмкүн. Объекттин касиетине ылайык жарык агымынын физикалык касиеттери – жарыктык жана түстүү, амплитудасы жана толкун узундугу, тегиздик, фаза жана толкун таралуу багыты менен шартталган. Ар кандай микроскопиялык изилдөө ыкмалары ушул мүнөздөмөлөрдү колдонууга негизделген.
Өзгөчөлүк
Жарык методдор менен изилдөө үчүн объекттер адатта боёлот. Бул алардын айрым касиеттерин аныктоого жана сүрөттөөгө мүмкүндүк берет. Бул кыртыштардын бекитилишин талап кылат, анткени боёгондо кээ бир структуралар өлгөн клеткаларда гана ачылат. Тирүү клеткаларда боёк цитоплазмада вакуоль түрүндө бөлүнөт. Ал структураларды боёбойт. Бирок жарык микроскопунун жардамы менен жандуу нерселерди да изилдөөгө болот. Бул үчүн изилдөөнүн маанилүү ыкмасы колдонулат. Мындай учурларда караңгы талаа конденсатору колдонулат. Ал жарык микроскопуна орнотулган.
Боёлбогон объекттерди изилдөө
Ал фазалык контрасттык микроскопиянын жардамы менен жүргүзүлөт. Бул ыкма объекттин өзгөчөлүктөрүнө ылайык нурдун дифракциясына негизделген. Экспозиция процессинде фазанын жана толкун узундугунун өзгөрүүсү байкалат. Микроскоптун объектисинде тунук пластинка бар. Жандуу же туруктуу, бирок түстүү эмес объекттер өздөрүнүн тунуктугунан улам алар аркылуу өткөн нурдун түсүн жана амплитудасын дээрлик өзгөртпөйт, бул толкун фазасынын жылышын гана жаратат. Бирок ошол эле учурда объект аркылуу өтүп, жарык агымы пластинкадан четтейт. Натыйжада объект аркылуу өткөн жана жарык фонго кирген нурлардын ортосунда толкун узундугунун айырмасы пайда болот. Белгилүү бир мааниде визуалдык эффект пайда болот - караңгы объект ачык фондо даана көрүнүп калат, же тескерисинче (фазалык плитанын өзгөчөлүктөрүнө ылайык). Аны алуу үчүн айырма толкун узундугунун кеминде 1/4 бөлүгүн түзүшү керек.
Аноптралдык ыкма
Бул фаза-контраст ыкмасынын бир түрү. Аноптралдык ыкма фону жарыктын түсүн жана жарыктыгын гана өзгөрткөн атайын пластинкалары бар линзаны колдонууну камтыйт. Бул боёлбогон жандуу объектилерди изилдөө мүмкүнчүлүктөрүн кыйла кеңейтет. Фаза-контрасттык микроскопиялык изилдөө ыкмасы микробиологияда, паразитологияда өсүмдүк жана жаныбарлардын клеткаларын изилдөөдө,эң жөнөкөй организмдер. Гематологияда бул ыкма кандын жана жилик чучугунун элементтеринин дифференциациясын эсептөө жана аныктоо үчүн колдонулат.
Интерференция ыкмалары
Бул микроскопиялык изилдөө ыкмалары көбүнчө фаза-контрасттыктар сыяктуу эле көйгөйлөрдү чечет. Бирок, акыркы учурда адистер объектилердин контурларын гана байкай алышат. Интерференциялык микроскопиялык изилдөө методдору алардын бөлүктөрүн изилдөөгө, элементтерге сандык баа берүүгө мүмкүндүк берет. Бул жарык нурунун бифуркациясынын эсебинен мүмкүн. Бир агым объекттин бөлүкчөсүнөн өтүп, экинчиси өтүп кетет. Микроскоптун окулярында алар биригип, интерференцияланат. Натыйжада фаза айырмасы ар кандай клетка структураларынын массасы менен аныкталышы мүмкүн. Аны берилген сынуу көрсөткүчтөрү менен ырааттуу өлчөп, туруктуу эмес ткандардын жана жандуу объекттердин калыңдыгын, алардагы белоктун курамын, кургак заттын жана суунун концентрациясын жана башкаларды аныктоого болот. Алынган маалыматтарга ылайык адистер мембрананын өткөрүмдүүлүгүн, ферменттердин активдүүлүгүн жана клеткадагы метаболизмди кыйыр түрдө баалоого жөндөмдүү.
Поляризация
Николь призмаларын же пленкалуу полароиддерди колдонуу менен жүргүзүлөт. Алар дары менен жарык булагынын ортосунда жайгаштырылат. Микробиологиядагы поляризациялык микроскопиялык изилдөө ыкмасы бир тектүү эмес касиеттерге ээ объекттерди изилдөөгө мүмкүндүк берет. Изотроптук структураларда жарыктын таралуу ылдамдыгы тандалган тегиздиктен көз каранды эмес. Бул учурда анизотроптук системаларда ылдамдык ылайык өзгөрөтобъекттин туурасынан же узунунан огу боюнча жарыктын багыттуулугу. Эгерде структура боюнча сынуу чоңдугу туурасынан кеткенге караганда чоңураак болсо, кош оң сынуу түзүлөт. Бул катуу молекулярдык багыты бар көптөгөн биологиялык объекттерге мүнөздүү. Алардын баары анизотроптук. Бул категорияга, атап айтканда, миофибрилдер, нейрофибрилдер, кирпиктүү эпителийдеги кирпиктер, коллаген жипчелери жана башкалар кирет.
Поляризация мааниси
Нурлардын сынуу табиятын жана объекттин анизотропия көрсөткүчүн салыштыруу структуранын молекулярдык түзүлүшүн баалоого мүмкүндүк берет. Поляризация ыкмасы анализдин гистологиялык методдорунун бири катары иштейт, цитологияда колдонулат ж.б. Жарыкта түстүү объекттерди гана изилдөөгө болбойт. Поляризация ыкмасы ткандардын бөлүктөрүнүн боёксуз жана фиксацияланбаган - жергиликтүү - препараттарын изилдөөгө мүмкүндүк берет.
Люминесценттик трюктар
Алар спектрдин көк-кызгылт көк бөлүгүндө же ультрафиолет нурларында жарык берүү үчүн кээ бир объекттердин касиеттерине негизделген. Белоктор, кээ бир витаминдер, коферменттер, дарылар сыяктуу көптөгөн заттар биринчилик (ички) люминесценцияга ээ. Фторхромдор, атайын боёктор кошулганда башка объекттер жаркырап баштайт. Бул кошумчалар жеке клеткалык структураларга же химиялык кошулмаларга тандап же диффузиялык түрдө тарайт. Бул касиет гистохимиялык жана люминесценттик микроскопияны колдонуу үчүн негиз болгонцитологиялык изилдөөлөр.
Колдонуу аймактары
Иммуно-флуоресценцияны колдонуу менен эксперттер вирустук антигендерди аныкташат жана алардын концентрациясын аныкташат, вирустарды, антителолорду жана антигендерди, гормондорду, метаболизмдин ар кандай продуктуларын ж.б.у.с. Ушуга байланыштуу герпес, паротит, вирустук гепатит, грипп жана башка инфекцияларды диагностикалоодо материалдарды изилдөөнүн люминесценттик ыкмалары колдонулат. Микроскопиялык иммунофлуоресценция ыкмасы залалдуу шишиктерди таанууга, инфаркттын алгачкы стадияларында жүрөктүн ишемиялык аймактарын аныктоого жана башкаларга мүмкүндүк берет.
Ультрафиолет нурун колдонуу
Ал тирүү клеткаларга, микроорганизмдерге же туруктуу, бирок боёксуз, көзгө көрүнгөн жарык-тунук ткандарга кирген бир катар заттардын белгилүү бир толкун узундуктагы УК нурларын сиңирүү жөндөмүнө негизделген. Бул, атап айтканда, макромолекулярдык бирикмелер үчүн мүнөздүү. Аларга белоктор, ароматтык кислоталар (метилаланин, триптофан, тирозин ж. б.), нуклеиндик кислоталар, пирамидалык жана пуриндик негиздер ж.б. Ультрафиолет микроскопиясы бул кошулмалардын локализациясын жана санын тактоого мүмкүндүк берет. Тирүү объекттерди изилдөөдө адистер алардын жашоо процесстериндеги өзгөрүүлөрдү байкай алышат.
Кошумча
Инфракызыл микроскопия жарыкка жана УК нурларына тунук эмес объекттерди сиңирүү аркылуу изилдөө үчүн колдонулаттолкун узундугу 750-1200 нм болгон агым структуралары. Бул ыкманы колдонуу үчүн, алдын ала химиялык тазалоо үчүн препараттарды дуушар кылуунун кереги жок. Эреже катары, инфракызыл ыкма антропология, зоология жана башка биологиялык тармактарда колдонулат. Медицинага келсек, бул ыкма негизинен офтальмологияда жана нейроморфологияда колдонулат. Көлөмдүк объекттерди изилдөө стереоскопиялык микроскопиянын жардамы менен жүргүзүлөт. Жабдуулардын конструкциясы ар кандай бурчта сол жана оң көз менен байкоо жүргүзүүгө мүмкүндүк берет. Тунук эмес объекттер салыштырмалуу аз чоңойтууда (120 эседен ашык эмес) каралат. Стереоскопиялык ыкмалар микрохирургияда, патоморфологияда жана соттук медицинада колдонулат.
Электрондук микроскоп
Ал макромолекулярдык жана субклеткалык деңгээлдеги клеткалардын жана ткандардын түзүлүшүн изилдөө үчүн колдонулат. Электрондук микроскопия изилдөө тармагында сапаттык секирик жасоого мүмкүндүк берди. Бул ыкма биохимия, онкология, вирусология, морфология, иммунология, генетика жана башка тармактарда кеңири колдонулат. Жабдуулардын чечүүчүлүгүнүн олуттуу өсүшү электромагниттик талаалар аркылуу вакуумда өткөн электрондордун агымы менен камсыз кылынат. Акыркысы, өз кезегинде, атайын линзалар менен түзүлгөн. Электрондор нерсенин түзүмдөрү аркылуу өтүү же алардан ар кандай бурчта четтөөлөр менен чагылуу мүмкүнчүлүгүнө ээ. Натыйжада инструменттин люминесценттик экранында дисплей түзүлөт. Трансмиссиялык микроскопиянын жардамы менен тегиздик сүрөт, тиешелүүлүгүнө жараша көлөмдүү скандоо менен алынат.
Керектүү шарттар
Электрондук микроскопиялык экспертизадан өтүүдөн мурун объект атайын даярдыктан өтөрүн белгилей кетүү керек. Атап айтканда, ткандарды жана организмдерди физикалык же химиялык фиксациялоо колдонулат. Секциялык жана биопсия материалы, андан тышкары, суусуздандырылып, эпоксиддик чайырларга салынып, алмаз же айнек бычак менен өтө жука бөлүктөргө кесилет. Андан кийин алар карама-каршы коюлуп, изилденет. Скандоочу микроскопто объекттердин беттери каралат. Бул үчүн аларга вакуумдук камерада атайын заттар чачылат.
